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常見技術問題

法醫樣本DNA提取與保存常用方法

發布日期:2014-12-27閱讀次數:3787

    在法醫科學鑒定中用于RFLP分析和PCR擴增分型的DNA樣本,其來源有新鮮或凍融全血、外周血淋巴細胞、血痕、精斑、毛發、組織塊、骨、牙及其它樣本,根據樣本的來源所需提取DNA方法要有選擇性,決不能一概而論,否則得不到需要的DNA。
    下面介紹四種類型:Chelex-100提取法應用于新鮮或者凍融血;鹽析提取法應用于新鮮或凍融血液、血清中細菌、病毒的DNA;有機溶劑提取法應用于血痕、精斑、唾液斑、骨、牙組織;Glass milk方法應用于陳舊骨、遺骸、牙。
提取生物檢材的DNA,關鍵在于選擇恰當的DNA提取方法及生物樣本采集的時限和正確的保存,防止外源性DNA的污染。
1.鹽析法
無機鹽提取法是用醋酸鈉通過鹽析原理去除非核酸物質,主要用于血液或血痕、精液或精斑、毛發樣本,其優點是提取DNA回收率高,質量也好于Chelex-100方法。
2.有機溶劑法
通過酚-氯仿混合物萃取DNA溶液中的蛋白質類有機物質,而保留DNA于水相溶液中。適用所有生物檢材,其提取DNA量比Chelex法和無機鹽提取法多,且DNA分子結構完整,特別適合RFLP、測序等需要大分子DNA分析技術。
3.Chelex法
Chelex 100能有效除去非核酸有機物,主要用于提取全血或血痕、精液或精斑、混合斑、毛發、培養細胞等。但因生物樣本來源不同其操作方法有所差異。
4.Glass milk法
在某些裂解液條件下,二氧化硅微粒特異捕獲有機質溶液中的DNA分子,而得以分離生物檢材的DNA,A260/A280多數在1.6~1.8之間,對陳舊骨核等樣本提取DNA模板得率較有機溶劑法高。
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